《生化危机5》以延续一切故事开端的《生化危机》洋房危机10年后为背景，故事舞台搬到了人类发源地非洲，在这块炎热的大地上拥有并非僵尸也不属于寄生兽的敌人，饱经历练的克里斯（Chris）将与新搭档谢娃（Sheva）共同面对潜藏于黑暗大陆的神秘生化危机。登场敌人部分，除了有玩家所熟悉的生化僵尸犬，貌似巨型蝙蝠的全新登场生化合成怪兽，以及受到寄生而失去理智成为嗜血杀人狂的电锯人、巨斧刽子手等也都将一一登场。
在伙伴合作模式方面，克里斯与谢娃将以火力互相掩护，弥补各自的视线死角，并视情况给予伙伴必要的协助，还可以透过共同行动来攀高越墙，克服地形障碍。在PC版当中，特别新增新佣兵模式，敌人将比家用机版本多了三倍，同时克里斯与谢娃都添置了新服装，谢娃添加了时尚的晚礼服 特色的土著装，克里斯则是斑马条纹服装和S.T.A.R.S.服装。
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